青海藏雪鸡和高山雪鸡血清淀粉酶同工酶酶谱研究

同工酶 ( Isozymes)是指具有相同催化功能而化学结构不同的酶, 它受一个或几个基因座等位基因的控制, 是动物种群特征的重要组成部分, 已广泛应用于种群亲缘关系分析、亲子鉴定以及近缘种动物分类等方面。有关藏雪鸡和高山雪鸡的形态特征、 生态习性、 地理分布、 繁殖性能、 血液学特性以及经济意义已有很多报道 [1- 5], 而对于其血清淀粉酶( Serum amylase, 简称 AMY)同工酶酶谱的研究尚未见报道。朝阳博发农业科技有限公司

     鉴于此, 笔者于 2009年 6月对青海省野生救护中心饲养的藏雪鸡和高山雪鸡种群进行了血清淀粉酶同工酶酶谱的研究, 旨在补充和丰富其血液基因储备, 并为其资源保护和利用以及繁殖育种等提供理论依据。

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材料与方法

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供试动物

     系青海省野生动物繁殖中心饲养的 10只藏雪鸡与 10只高山雪鸡及青海省湟源县养殖户饲养的 20只家鸡。

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血样采集
朝阳农业

     从供试动物翼下静脉采取血样 2 m,l迅速分离出血清, 供 AMY 电泳用。

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电泳与判型

     采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳( PAGE )法分离 AMY同工酶, 电泳操作参考胡能书等 [ 6]的方法进行。孵育液用 pH值为 5 . 0、 0 . 15 mmol/L的醋酸 - 醋酸钠缓冲液。每个样本重复电泳 2次, 分别用含钙离子 ( 0. 02mol/L CaC l 2 )的缓冲液和不含钙离子的缓冲液, 在 37 水浴锅中孵育 1~ 2 h后, 用稀碘液显色, 不着色的区带为 AMY活性区带。根据泳动速度、 钙离子的影响以及酶活性显现与否, 判定电泳表型。

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电泳迁移率

     用相对迁移率来表示。各电泳区带的相对迁移率 ( R f)按常规方法计算, 即              

                                                                 相对迁移率 ( R f) = 酶带泳动距离 ( X1 )

                                                                             指示染料泳动距离 ( X2 )                            * 100 %

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结果与分析

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藏雪鸡和高山雪鸡及家鸡的血清同工酶酶谱
博发农业

     由图 1可知, 根据泳动速度, 它们共显现 3种同工酶带, 从阳极到阴极依次为 AMY1、 AMY2和 AMY3。AMY1同工酶的泳动速度最快, 在藏雪鸡中只呈现 1条窄的活性极弱的区带, 而在高山雪鸡中不显现酶活性区带, 在家鸡中在不加钙离子的孵育液中能显现活性, 加钙离子后活性增强。AMY2同工酶的泳动速度介于 AMY1和 AMY 3之间, 仅在加钙离子的孵育液中才显现活性。AMY3同工酶紧挨着电泳起始部, 且活性较弱。